Laporan Praktikum Enzim Amilase

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

ENZIM AMILASE

Disusun oleh

Nama                    :       Hanis Nuraini                        

NIM                       :       C31120062

Golongan             :       A

Dosen                   :       Nurkholis S.Pt, MP

JURUSAN PETERNAKAN

POLITEKNIK NEGERI JEMBER

2013

Kata Pengantar

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan kesempatan bagi saya untuk melaksanakan kegiatan praktikum biokimia “Enzi Amilase” dengan menggunakan sub uji Enzim milase sativa dane nzim amilase.

Biokimia adalah suatu ilmu yang mempelajari tentang macam –macam molekul yang ada di dalam sel makhluk hidup atau organisme dan reaksi kimia yang terjadi diantara molekul-molekul tersebut. Di dalamnya terdapat identifikasi berbagai macam zat termasuk karbohidrat yang berperan sebagai sumber energi paling tinggi . melalui praktikum ini di harapkan para pembaca khususnya mahasiswa dapat memahami dan mengaplikasikan materi dalam kehidupan sehari-harinya.

Ucapan terima kasih kepada Dosen pembimbing serta teknisi yang membantu jalannya praktikum sehingga kegiatan ini dapat berjalan dengan baik, serta teman- teman mahasiswa yang ikut berpartisipasi dalam praktikum ini.

Laporan hasil praktikum ini masih jauh dari kesempurnaan,mengingat keterbatasan pengetahuan dan materi.Oleh karena itu saran dan kritik dari para pembaca menjadi suatu pertimbangan bagi saya demi kesempurnaan laporan ini dan pembuatan laporan selanjutnya.

BAB I
PENDAHULUAN

1.      Tujuan Instruksional Khusus

Setelah menyelesaikan praktikum, mahasiswa di harapkan mampu:

1.1.Mengetahui kerja enzim α-Amylase dalam hidrolisis pati.

1.2.Mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas / kerja enzim        α-Amylase.

1.3.Mengetahui cara kerja amilase pada ragi tape.

2.      Landasan Teori

Enzim adalah sebuah protein yang mempunyai fungsi khusus. Enzim berperan untuk mengkatalisis proses kimia(biokimia) dalam makhluk hidup atau dalam system biologi. Tanpa adanya enzim biasanya reaksi kimia akan berlangsung sangat lambat, bahkan mungkin tidak dapat terjadi. Seperti telah di singgung di depan, kerja enzim sangat khusus dan spesifik . artinya, satu enzim hanya menjalankan satu fungsi saja. Misalnya adalah enzim α-Amylase yang bekerja spesifik dalam mulut, enzim ini terdapat bersama dengan air liur (saliva), enzim α-Amylase berperan dalam melakukan hidrolisis awal makanan terutama yang mengandung pati.

Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi fungsi enzim antara lain suhu , pH, substrat, konsentrasi enzim dan zat-zat penghambat. Suhu berpengaruh terhadap fungsi enzim karena reaksi kimia menggunakan katalis enzim yang dapat dipengaruhi oleh suhu. Di samping itu, karena enzim adalah suatu protein, maka kenaikan suhu dapat menyebabkan denaturasi dan bagian aktif enzim akan terganggu, sehingga konsentrasi dan kecepatan enzim berkurang. Kemudian pH berpengaruh terhadap fungsi enzim karena pada umumnya efektifitas maksimum suatu enzim pada pH optimum, yang lazimnya berkisar antara pH 4,5 – 8,0. Pada pH yang terlalu tinggi atau terlalu rendah umumnya enzim menjadi non aktif secara irreversibel karena menjadi denaturasi protein.

Pati disusun oleh amilosa dan amilopektin. Amilosa merupakan polisakarida yang linier, sedangkan amilopektin adalah yang bercabang. Tiap jenis pati tertentu di sususn oleh kedua fraksi tersebut dalam perbandingan yang berbeda-beda. Pada pati jenis yang rekat(addesif) amilosa dalam pati bekisar antara 20-30% pati pada beras dan sorghum sebagian terbesar penyusunnya adalah amilopektin.

Pemisahan antara fraksi amilosa dan amilopektin dapat menggunakan elektrodialisa atau dengan n- butanol atau thymol. Amilopektin larut dalam n-butanol sedangkan amilosa tidak larut. Amilosa memberikan warna biru dengan larutan iodine dan amilopektin memberikan warna merah violet.

3.      Organisasi

3.1.Mahasiswa di bagi menjadi beberapa kelompok praktikum dan masing-masing kelompok di pimpin seorang ketua kelompok.

3.2.Semua kelompok kerja praktikum di bimbing seorang dosen pembimbing praktikum di bantu oleh teknisi laboratorium.

BAB II
METODOLOGI PRAKTIKUM

v  Tempat dan waktu praktikum

Tempat                        : Laboratorium Analisis Pangan

Hari / tanggal              : Senin - Rabu, 20 - 22 Mei 2013

v  Materi

Alat

§   Cawan petri

§   Pipet tetes

    Bahan

§   Uji amilase sativa

-          Larutan amilum (pati) 1%

-          HCl 1 M

-          NaOH1 M

-          Larutan yodium encer

-          Air liur (saliva) – disediakan sendiri oleh prktikan

§  Uji amilase

-          Singkong rebus

-          Ragi

-          I₂

v  Metode

Ø  Uji amilase saliva

1.      Masing-masing kelompok menyiapkan 5 buah tabung reaksi

2.      Tiap tabung reaksi diisi 3 mL larutan amilum (pati), kemudian di lanjutkan dengan perlakuan-perlakuan berikut:

-          3mL larutan amilum + 1mL larutan saliva + 1mL HCl 1 M , diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 10 menit.

-          3mL larutan amilum + 1mL larutan saliva + 1mL NaOH 1 M , diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 10 menit.

-          3mL larutan amilum + 1mL larutan saliva ,diinkubasi pada suhu 80⁰C selama 10 menit.

-          3mL larutan amilum + 1mL larutan saliva ,diinkubasi pada suhu 4⁰C selama 10 menit.

-          3mL larutan amilum + 1mL larutan saliva ,diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 10 menit.

3.      Setelah diinkubasi, tetesi dengan 3 tetes larutan yodium.

4.      Mengamati perubahan warna yang terjadi.

5.      Mencatat hasil pengamatan dalam bentuk tabel.

Ø  Uji amilase

Pengamatan dilakukan selama tiga hari.

      Pada hari pertama

-          Rebus singkong kemudian dinginkan

-          Simpan dalam cawan petri, kemudian taburi dengan ragi, lalu peram.

-          Beri label T-1

      Pada hari kedua

-          Ulangi prosedur yang sama seperti hari pertama

-          Beri kode T-2

      Pada hari ketiga

-          Rebus singkong lalu dinginkan

-          Masing-masing contoh di tetesi dengan larutan I₂

-          Mengamati perubahan reaksi yang terjadi

-          Mencatat hasil pengamatan dalam bentuk tabel.

BAB III
HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan Enzim Amilase Sativa

Tabung reaksi	HCl 1 M + 1mL saliva+ 1mL amilum	NaOH 1M + 1mL saliva + 1mL amilum	800C (10 menit)	40C (10 menit)	370C (10 menit)
1	Warna awal putih keruh				Setelah di tetesi iodium dan dihomogenisasi, warna larutan menjadi biru kehitaman.
2		Warna awal putih keruh			Setelah di homogenisasi dan di tetesi iodium, warna larutan menjadi putih agak keruh
Larutan tanpa penambahan HCl ataupun NaOH (Saliva 1mL + Amilum 1mL)
3	Warna awal larutan putih keruh		Setelah di tetesi iodium 3 tetes dan di homogenisasi,warna larutan menjadi putih keruh
4	Warna awal larutan putih keruh			Setelah ditetesi iodium 3 tetes dan di homogenisasi, warna larutan menjadi violet
5	Warna larutan awal putih keruh				Setelah ditetesi iodium 3 tetes dan di homogenisasi, warna larutan menjadi putih kebiruan

Hasil Pengamatan Enzim Amilase

No	Perlakuan	Hasil pengamatan
1	Singkong rebus yang berada pada cawan T1 yang sudah di taburi ragi, disimpan selama 3 hari kemudian ditetesi iodium 1 tetes	Singkong pada cawan T1 yang disimpan selama 3 hari teksturnya menjadi sangat lembek (terfermentasi) dan jika ditetesi iodium akan menimbulkan bercak dengan warna hitam tapi pudar
2	Singkong rebus yang berada pada cawan T2 yang sudah di taburi ragi, disimpan selama 2 hari kemudian ditetesi iodium 1 tetes	Singkong pada cawan T2 yang disimpan selama 2 hari teksturnya menjadi agak lembek dan jika ditetesi iodium akan menimbulkan warna hitam pekat
3	Singkong rebus yang berada pada cawan T3 tanpa penambahan ragi dan tanpa penyimpanan kemudian ditetesi iodium 1 tetes	Singkong rebus pada cawan T3 , tidak di taburi ragi serta tanpa penyimpanan dan langsung ditetesi iodium , teksturnya tetap keras (karena tidak terfermentasi) dan jika di tetesi larutan iodium akan menimbulkan warna hitam yang sangat pekat.

v  Catatan

Tingkat kepekatan

-          Cawan T3

-          Cawan T2

-          Cawan T1

BAB IV

ANALISA DATA DAN PEMBAHASAN

v  Enzim amilase sativa

Berdasarkan hasil pengamatan dalam praktikum yang telah di lakukan, dengan perlakuan yang berbeda antara kelima tabung di diperoleh hasil sebagai berikut:

-          Pada tabung 1 yang berisi larutan HCl, saliva, dan amilum dengan volume yang sama yaitu 1 mL memiliki warna larutan putih keruh. Setelah diinkubasi dengan suhu 37⁰C selama 10 menit dan di tetesi larutan yodium sebanyak 3 tetes serta dihomogenisasi maka perubahan yang terjadi adalah larutan akan berwarna biru kehitaman.

-          Pada tabung 2 berisi larutan NaOH, saliva dan amilum dengan perbandingan volume yang sama dan perlakuan yang sama dan memiliki warna awal yang sama pula  seperti tabung 1. Namun memiliki hasil akhir yang berbeda yaitu warna larutan tetap putih agak keruh.

-          Untuk tabung 3,4, dan 5. Hanya pencampuran antara saliva dan amilum dengan perbandingan 1:1 mL memiliki warna awal yang sama yaitu putih keruh.Dengan perlakuan yang berbeda (tabung 3 inkubasi 80⁰C, tabung 4 4⁰C, dan tabung 5 37⁰C) setelah di tetesi iodium dan dihomogenisasi, warna larutan pada tabung 3 menjadi putih keruh,tabung 4 menjadi ungu violet,dan tabung 5 menjadi putih kebiruan.

Amilum dapat tehidrolisis menjadi dekstrin dan oligosakarida oleh peran enzim α-amilase liur yang mampu membuat polisakarida (pati) dan glikogen dihidrolisis menjadi maltosa dan oligosakarida lain dengan menyerang ikatan glikosodat α(1 4). Amilum dan dekstrin yang molekulnya masih besar dengan iodium memberi warna biru, dekstrin-dekstrin antaranya (eritrodekstrin) memberi warna coklat kemerah-merahan. Sedangkan dekstrin-dekstrin yang molekulnya sudah kecil lagi (akhrodekstrin) dan maltosa tidak memberi warna dengan iodium. Timbulnya warna biru tua pada larutan tabung 1 menunjukkan bahwa amilum terhidrolisis menjadi amilodekstrin (hidrolisis amilum belum sempurna),kurang sempurnanya hidrolisis kemungkinan disebabkan oleh larutan HCl yang bersifat asam . Pada tabung 2 warna menjadi putih karena amilum dapat terhidrolisis sempurna menjadi maltosa karena pengaruh larutan NaOH yang bersifat basa (aktivitas enzim di pengaruhi oleh faktor pH asam atau basa) dan larutan tersebut mencapai titik akhromati yaitu titik di mana campuran larutan tidak memberikan warna lagi (jernih). pH berpengaruh terhadap fungsi enzim karena pada umumnya efektifitas maksimum suatu enzim pada pH optimum, yang lazimnya berkisar antara pH 4,5 – 8,0. Pada pH yang terlalu tinggi atau terlalu rendah umumnya enzim menjadi non aktif secara irreversibel karena menjadi denaturasi protein.Untuk tabung 3 warna larutan putih keruh karena pada suhu di atas 50⁰C enzim akan rusak dan tidak dapat bereaksi (karena enzim tersusun dari protein maka kenaikan suhu dapat menyebabkan denaturasi dan bagian aktif enzim akan terganggu, sehingga konsentrasi dan kecepatan enzim berkurang) sehingga warna larutan tidak berubah yaitu tetap putih keruh. Sedangkan pada tabung 4 dengan suhu rendah di bawah suhu optimum yaitu 4⁰C enzim akan tetap bereaksi namun bekerja lambat ditandai adanya warna violet pada larutan menandakan bahwa amilum dapat terhidrolisis namun lambat. Sedangkan pada tabung 5, amilum dapat terhidrolisis dengan normal pada suhu yang optimum yaitu 37⁰C menjadi amilodekstrin di tandai dengan timbulnya warna kebiruan pada larutan.

v  Uji enzim  amilase

Dari hasil praktikum yang telah di lakukan,diperoleh data bahwa:

-          Pada cawan T1 yang berisi singkong rebus dengan taburan ragi dan disimpan selama 3 hari,setelah ditetesi larutan iodium akan menimbulkan bercak warna hitam tetapi pudar.

-          Pada cawan T2 dengan perlakuan yang sama dengan cawan sebelumnya namun disimpan selama 2 hari, setelah di tetesi iodium menimbulkan warna bercak hitam pekat.

-          Pada cawan T3 berisi singkong rebus tanpa ragi dan tanpa penyimpanan , setelah ditetesi larutan iodium akan menimbulkan bercak warna hitam yang sangat pekat di bandingkan kedua tabung sebelumnya.

Enzim adalah zat yang dihasilkan oleh mikroorganisme, pada singkong entasi terdapat peran dari Saccaromyces cerevicae yang menghasilkan enzim berupa enzim amilase yang mampu memecah pati atau amilum menjadi gula sederhana seperti glukosa yang jika ditetesi oleh iodium akan menimbulkan warna hitam yang kemudian memudar menjadi hitam kebiruan seperti yang terjadi pada cawan T1 yang disimpan selama 3 hari akan menyebabkan enzim dapat bekerja secara sempurna dalam memfermentasi. Untuk cawan T2 , singkong rebus dan ragi hanya disimpan dalam waktu 2 hari sehingga saccaromyses yang ada lebih sedikit dan enzim juga belum sempurna dalam memfermentasi sehingga tekstur kurang lembek dan warna lebih pekat di banding singkong pada cawan T1. Sedangkan pada cawan T3 singkong tersebut tanpa ragi menyebabkan tidak tumbuhnya saccharomyces sehingga tidak dihasilkan enzim, amilum tidak bereaksi (terhidrolisis) di tandai dengan warna hitam sangat pekat. Salah satu literatur menyatakan bahwa suatu enzim dapat bekerja 10⁸ sampai 10¹¹ kali lebih cepat dibandingkan laju reaksi tanpa katalis. Enzim bekerja sebagai katalis dengan cara menurunkan energi aktifasi,sehingga laju reaksi meningkat.

BAB V

PENUTUP

v  Berdasarkan hasil pengamatan pada praktikum serta sumber dari beberapa literatur, di peroleh kasimpulan sebagai berikut

-          Aktivitas enzim dapat di pengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya sifat asam atau basa dari suatu zat dan suhu. Zat yang bersifat asam dan suhu yang semakin rendah dapat memperlambat hidrolisis amilum, begitu pula sebaliknya. Namun jika suhu terlalu tinggi akan menyebabkan enzim tidak dapat bereaks karena terjadi denaturasi.

-          Enzim dapat di hasilkan dari mikroorganisme, enzim tersebut berfungsi sebagai katalisator dalam mempercepat reaksi kimia.

DAFTAR PUSTAKA

·         Laporan Enzim amilase (PDF).S1 Keperawatan FIK UKSW

·         Laporan Biokimia Air Liur.Mita Sasmita

http://www.543ura1.blogspot.com./ 25 Mei 2013. 09.12 WIB

Laprona final_Lamiya & Mareta (PDF)

Laporan Praktikum Enzim.Robin Arsad

http://www.robinchemistry.blogspot.com./ 23 Mei 2013.08.00 WIB